產品描述

TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，中文全稱3,3',5,5'-四甲基聯苯胺，是辣根過氧化物酶（HRP）的常用顯色底物之一。在HRP的催化下，TMB被過氧化氫（H2O2）氧化生成藍色產物。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸終止上述反應后，產物轉變為黃色，最大吸收峰為450 m。傳統的TMB顯色試劑通常以AB液形式提供（TMB和H2O2溶液分到兩管，僅在使用前才可混合使用），并且容易產生沉淀，使用起來相對不方便，且容易導致操作誤差。為克服以上缺點，我司采用新的TMB顯色技術，將所有相關試劑全部混合配成單一溶液。具有以下優點：

1）即開即用，操作簡單，使用前無需做AB液混合的準備；檢測靈敏度不低于AB液體系；

2）僅由單一溶液組成，簡化了操作步驟，也降低了操作誤差，結果更加穩定；

3）含有 的穩定劑，保證溶液4℃下長期保存；

4）相比于其他HRP酶顯色底物（如ABTS和OPD）相比，檢測靈敏度更高，而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有機溶劑，安全無毒；

5）另外，TMB溶液可分為沉淀可溶型和沉淀不可溶型，前者適用于ELISA及其他通過液體反應檢測HRP的應用，后者適用于WB或其他通過沉淀反應檢測HRP的應用。

本品為單一溶液形式且沉淀可溶型的TMB顯色液，適用于ELISA檢測，操作時只需加入200μl即用型的顯色液，做簡單孵育，加入2M H2SO4終止反應后，即可用分光光度計在450nm處測定吸光度。本品可供完成約500個樣品的檢測。另外，本品也可用于血液或血紅蛋白等樣品中過氧化物酶量的檢測。

運輸和保存方法

冰袋運輸。4℃避光保存，一年有效。

注意事項

1）TMB對人體有刺激性，請注意適當防護。
2）正常情況，本顯色液呈現無色或者淡藍色（OD650nm＜0.04）。若是出現渾濁，或者顏色明顯很藍，應停止使用。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4）本產品僅作科研用途！

使用方法
1） 使用之前，取出適量單組份TMB顯色液，使其回到室溫再開始使用；
2） 對于ELISA檢測：參考ELISA 檢測試劑盒的實驗步驟，當加入HRP標記的抗體并孵育一段時間后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min。洗滌完畢后，去除洗滌液，加入200μl TMB顯色液。
對于在96孔板內進行的其他適當檢測（如檢測組織或細胞樣品內源性過氧化物水平）：直接在96孔板內加入10-20μl 樣品，之后加入200μl TMB顯色液；
3） 室溫避光孵育3-30min或更長時間（可長達24h），直至顯色至預期深淺（此時反應液為藍色）。
4） 加入50μl 2M H2SO4終止反應，溶液由藍色轉變為黃色，隨后在450nm測定吸光度。或直接在370nm或652nm測定吸光度。

常見問題

1. 背景顯色太深

1）如果背景（沒有樣品的對照）顯色太深，一方面需考慮使用適當的封閉液進行封閉，如商業化的封閉液或者商業化的和一抗相同來源的血清（5-10%）進行封閉。另一方面，直接使用經過適當親和吸附的二抗，以減小二抗的非特異性交叉吸附。

2）可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗濃度。另外，選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間也會有所幫助。

3）可考慮TMB底物本身反應過于強烈。為了避免沉淀的產生，可在終止反應后馬上讀數，或者進一步稀釋一抗和/或HRP結合物。

2. 沒有顯色或顯色太弱

1）適當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內，檢測二抗是否被正常顯色。

2）可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用 素檢測體系。

3）可以適當延長顯色時間。

4）如果上述改進不能獲得預期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。