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MTT是一種粉末狀化學試劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,中文為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,是一種黃顏色的染料。
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在540 或720nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
主要實驗流程為:
1. 接種細胞:用含10%胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板,每孔體積200ul。
2. 培養細胞:同一般培養條件,培養3-5天(可根據試驗目的和要求決定培養時間)。
3. 呈色:培養3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.繼續孵育4 h,終止培養,小心吸棄孔內培養上清液,對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ulDMSO,振蕩10min,使結晶物充分融解。
4. 比色:選擇490nm波長,在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值,記錄結果,以時間為橫坐標,吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。
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