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RACE的原理
RACE 是采用PCR 技術由已知的部分cDNA 順序來擴增出完整cDNA5’和3’末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。
3'RACE的原理
利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個引物結合位點，以連有SMART寡核營酸序列通用接頭引物的Oligo（dT）30MN作為鎖定引物反轉錄合成標準*鏈cDNA.然后用一個基因特異引物GSP1（gene specific primer，GSP）作為上游引物，用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作為下游引物，以cDNA*鏈為模板，進行PCR循環，把目的基因3' 末端的DNA片段擴增出來。
5'RACE的原理
先利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個引物結合位點，以Oligo（dT）30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下，反轉錄合成標準*鏈cDNA.利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性，在反轉錄達到*鏈的5'末端時自動加上3-5個（dC）殘基，退火后（dC）殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oliogo（dG）通用接頭引物配對后，轉換為以SMART序列為模板繼續延伸而連上通用接頭（見Figure 2 ）。然后用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作為上游引物，用一個基因特異引物2（GSP 2 genespecific primer，GSP）作為下游引物，以SMART*鏈cDNA為模板，進行PCR循環，把目的基因5'末端的cDNA片段擴增出來。終，從2個有相互重疊序列的3'/ 5'-RACE產物中獲得全長cDNA，或者通過分析RACE產物的3'和5'端序列，合成相應引物擴增出全長cDNA。
實驗流程
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