詳細介紹
【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產品名稱:蔗糖酶可見分光光度法測試盒
規格 : 50管/24樣
測試方法: 可見分光光度法
貨號:GOY-01S6695
分類:蔗糖系列
商品介紹:
蔗糖酶(EC 3.2.1.26)是碳水化合物消化吸收的關鍵酶之一,能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收。
測定原理
本試劑盒采用3.5-二硝基水楊酸法測定蔗糖酶催化產生的還原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水楊酸與還原糖共熱被還原成棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內還原糖的量和反應液的顏色深度成正比。此法操作簡便、迅速、雜質干擾較小。
所需的儀器和用品
可見分光光度計、沸水浴、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
癌胚抗原相關細胞粘附分子21抗體 微管相關蛋白樣蛋白3抗體
貓眼綜合征染色體候選基因5抗體 微管相關蛋白輕鏈3C抗體
卷曲螺旋結構域蛋白135抗體 微管相關蛋白抗體
跨膜結構域邊緣蛋白CEE抗體 微管相關蛋白Tau421抗體
分子伴侶CESK1蛋白抗體 微管相關蛋白FAM82B抗體
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蔗糖酶可見分光光度法測試盒成纖維細胞生長因子5mL Fura-2 AM( 鈣離子熒光探針 )1mg
成纖維細胞生長因子 -25mL FTA 血片 DNAout50 次
成纖維細胞生長因子 - 不含動物成分5mL Forskolin( 腺苷酸環化酶激活劑 )1mg
動物上皮細胞生長因子5mL Fluorescein-5-maleimide25mg
肝細胞生長因子5mL Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM25μL
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。