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DNA聚合酶是PCR反應的核心組分，廣泛應用于生物及醫學研究等領域。對于普通PCR，常規熱穩定DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）即可滿足需求。但對于高通量測序，擴增產物的準確性非常關鍵，優選高保真酶進行擴增。常規的高保真擴增酶無法讀取和擴增含有尿嘧啶和次黃嘌呤的模板，翌圣生物通過定向改造，推出Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase，該聚合酶可兼容含U堿基模板和常規模板，擴增效率高保真性好，而且酶本身各項殘留均很低，滿足多種應用方向的擴增需求。
哪些應用方向可優選Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase呢？
重亞硫酸氫鹽轉化/酶法轉化的DNA擴增-甲基化研究；
受損FFPE DNA樣本的擴增-腫瘤領域；
防止擴增子的氣溶膠污染-病原領域；
基于尿嘧啶切除的克隆-分子克隆。
圖1.Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的應用方向
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以上這些應用展示了Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在分子生物學研究中的多功能性和高效性，使其成為實驗室中的工具之一。
下面重點介紹Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在多重PCR擴增體系里的表現：
多重PCR (Multiplex polymerase chain reaction，MPCR) 是指通過一次PCR反應同時對多個靶標進行擴增，結合一定的檢測手段對擴增產物進行檢測從而實現對多個靶標進行診斷的技術。MPCR具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究。
多重PCR微生物多樣性檢測的應用非常廣泛，尤其是原核生物16S的多重PCR擴增測序。16S擴增子測序是指利用合適的通用引物擴增環境中微生物的16S rDNA/18S rDNA /ITS高變區或功能基因，通過高通量測序技術檢測PCR產物的序列變異和豐度信息，分析該環境下的微生物群落的多樣性和分布規律，以揭示環境樣品中微生物的種類、相對豐度、進化關系等。16S擴增子測序的技術路線如下：
圖2. 16S擴增子測序的技術路線
性能展示
實驗條件
樣本：土壤DNA 10 ng
一輪PCR：25μL體系，擴增28個循環，MGI平臺16S引物（16S-V3-V4,16S-V4），擴增酶2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix（13283ES）
二輪PCR：25μL體系，第一輪產物投入量50 ng，擴增6個循環，擴增酶包含Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase及另外兩種高保真擴增酶，0.9x純化，50μL洗脫
實驗結果
實驗結論
引物16S-V3-V4擴增的文庫主峰在600bp左右，引物16S-V4擴增的文庫主峰在500bp左右，擴增條帶與理論文庫條帶吻合；
第二輪PCR擴增時，在兩種擴增引物體系下12928相對擴增酶A和擴增酶B的擴增能力強，文庫產量最高。
產品推薦
產品名稱 | 產品貨號 | 產品應用 |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix Hieff Canace®耐U+高保真DNA聚合酶混合液 | 12928ES | 耐U高保真擴增 |
熱敏UDG含甘油Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG),heat-labile,1 U/μL | 10303ES | PCR防污染 |
Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL) | 14537ES | 基于尿嘧啶切除的克隆 |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix | 13283ES | 多重PCR擴增 |
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