小鼠ELISA試劑盒法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，以為小鼠ELISA試劑盒法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操縱等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。

可概括四個(gè)方面： 

1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。 

2、研究抗酶抗體的合成。

 3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。

 4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。

基本方法一　用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法: 

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜。越日，棄往孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌，下同)。 

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空缺孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。 

3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加進(jìn)新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。 

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加進(jìn)臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。 

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加進(jìn)2M硫酸0.05ml。 

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O·D值：在小鼠ELISA試劑盒檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空缺對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

基本方法二　用于檢測(cè)未知抗體的間接法： 

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。越日洗滌3次。 

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加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空缺、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照) 

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于反應(yīng)孔中，加進(jìn)新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。 

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其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

（二） 酶與底物

       酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物。是 小鼠ELISA試劑盒成敗的關(guān)鍵試劑，它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應(yīng)，還具有酶促反應(yīng)，顯示出生物放大作用，但不同的酶選用不同的底物。