我國(guó)鴨養(yǎng)殖數(shù)量位居世界shou位,近年來(lái)鴨的疫病日益增多,生產(chǎn)和使用的鴨源生物制品種類越來(lái)越多。外源病毒檢驗(yàn)是病毒類活疫苗質(zhì)量控制項(xiàng)目之一,對(duì)保證產(chǎn)品質(zhì)量至關(guān)重要。
根據(jù)GB/T 41698-2022,鴨源生物制品外源病毒的檢測(cè)有:鴨瘟病毒、鴨肝炎病毒Ⅰ型、鴨坦布蘇病毒、番鴨細(xì)小病毒、番鴨小鵝瘟病毒的鴨源生物制品外源病毒檢測(cè)。以下簡(jiǎn)述鴨瘟病毒的檢測(cè)方法:
1.加樣與孵育:取抗原包被板,分別將陰性對(duì)照血清、鴨瘟病毒陽(yáng)性對(duì)照血清和稀釋好的待檢血清加入到抗原包被板孔中,各2孔,100μL/孔。輕輕振勻孔中樣品,用封板膜密封包被板,置37℃孵育1h。
2.洗滌:去除封板膜,棄去孔中液體,用Miragen電動(dòng)移液器每孔加入300μL洗滌液,作用3min,棄去洗滌液,重復(fù)洗滌3次。可用洗板機(jī)或手動(dòng)洗滌。
3.與鴨瘟病毒單克隆抗體作用:用Miragen電動(dòng)移液器每孔加入鴨瘟病毒單克隆抗體100μL,用封板膜密封包被板,置37 ℃孵育1h。
4.洗滌:按2中方法洗滌。
5.與酶標(biāo)抗體作用:用Miragen電動(dòng)移液器每孔加入羊抗鼠酶標(biāo)抗體100μL,用封板膜密封包被板,置37℃孵育1h。
6.洗滌:按2中方法洗滌。
7.顯色:用Miragen電動(dòng)移液器每孔中加入TMB底物溶液100μL,輕搖2s,20℃~25 ℃下避光顯色10 min。
8.終止:用Miragen電動(dòng)移液器每孔加入終止液50μL,置酶標(biāo)儀在OD450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔OD值。
9.試驗(yàn)成立條件,當(dāng)陰性血清對(duì)照孔平均OD450nm值大于或等于0.8,且陽(yáng)性對(duì)照孔的陽(yáng)斷率(PD)大于或等于50%,判定檢測(cè)結(jié)果有效。
以上實(shí)驗(yàn)涉及多次小體積液體移取,實(shí)驗(yàn)室移取小體積(幾微升到10毫升)的液體,一般采用移液器。Miragen電動(dòng)移液器,數(shù)值靠設(shè)定或選定,電機(jī)控制活塞運(yùn)動(dòng),吸液和排液也更加穩(wěn)定,還有步驟少、調(diào)數(shù)快、模式多等諸多優(yōu)勢(shì)。Miragen電動(dòng)移液器可給電機(jī)多段信號(hào),從而達(dá)到吸液和排液分多次且各體積獨(dú)立可調(diào)。比如上面的標(biāo)準(zhǔn)溶液的移取,就可設(shè)置單吸多排(如吸200uL,排2次,每次100uL),程序可存儲(chǔ)和調(diào)用,非常便捷。
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