為什么要脫鹽,有什么好處?
保護您的數(shù)據(jù)和質(zhì)譜儀(MS)
使用質(zhì)譜進行完整蛋白和亞基分析時,非常希望在分析前去除不需要的成分。樣品前處理不僅可用于提高數(shù)據(jù)質(zhì)量,也是保護質(zhì)譜儀的一種方式。非揮發(fā)性樣品緩沖液會導致質(zhì)譜中出現(xiàn)鹽加合物以及分子量計算不準確。這種鹽還會快速污染離子源,甚至在儀器內(nèi)部中進一步降低靈敏度并造成儀器停機清潔?;ㄙM 10–15 分鐘從樣品基質(zhì)中除去鹽,或?qū)悠方粨Q到 MS 兼容的揮發(fā)性緩沖液中,可以提高質(zhì)量準確度并保護儀器。
對合成寡核苷酸快速脫鹽
對于詳細表征、配制或大分子寡核苷酸 HPLC,通過離子對反相或強陰離子交換進行純化是獲得高純度樣品的關鍵。但對于某些應用(如微陣列芯片、測序)中使用或作為 qPCR 引物中使用的小分子寡核苷酸(約 36 個堿基或更少),采用快速簡單的脫鹽步驟,即合成、剪切和脫鹽保護步驟去除小分子副產(chǎn)物就已經(jīng)足夠。
確保使用 InstantPC 標記的多聚糖實現(xiàn)靈敏的 N- 糖分析
使用 InstantPC 試劑盒的 Agilent AdvanceBio Gly-X N- 糖前處理可在最短一小時內(nèi)完成樣品釋放和 N- 糖標記。為獲得這一多聚糖分析的理想分析靈敏度,需要將起始糖蛋白溶于相容緩沖液中。InstantPC 與伯胺反應標記游離 N- 糖,因此含有伯胺的任何緩沖液將與多聚糖發(fā)生競爭標記。將緩沖液快速交換為非伯胺緩沖液(如 HEPES),有助于確保用戶獲得盡可能高的靈敏度。
AdvanceBio 脫鹽產(chǎn)品有什么優(yōu)勢
在 10–15 分鐘內(nèi)完成樣品前處理
用于分子量超過 5 kDa 的蛋白質(zhì)、大于 10 個堿基對的寡核苷酸或核苷酸
有三種產(chǎn)品形式:樣品體積 < 100 µL 或 < 1000 µL 的單個離心柱,以及樣品體積 < 50 µL 的 96 孔板
< 100 µL 的樣品達到 99% 鹽去除,< 1000 µL 的樣品達到 > 95% 鹽去除,樣品回收率 > 90%
在 pH 2.0–13.0 范圍內(nèi)穩(wěn)定
兼容所有常用緩沖液,以及濃度高達 0.2 mol/L NaOH、0.2 mol/L HCl、1 mol/L 乙酸、8 mol/L 尿素、6 mol/L 鹽酸胍、1% SDS、24% 乙醇、30% 丙醇或 30% 乙腈的溶液
工作原理
凝膠過濾或體積排阻色譜法(SEC)是一種基于分子大小的分離方法。在這種情況下,使用凝膠過濾進行組分分離,將高于截留分子量的樣品組分與低于截留分子量的所有組分分離。大于 5 kDa 的蛋白質(zhì)或長度超過 10 nt 或 bp 的寡核苷酸太大,無法有效地進入顆粒的孔隙結(jié)構(gòu),因此作為一個組分首先洗脫。較小的基質(zhì)組分和緩沖液鹽可以更有效地進入到顆粒的小孔中,從而保留在色譜柱上。
使用 AdvanceBio 離心柱(< 1000 µL)
部件號 1980-1105 中包含的半制備級離心柱旨在用于 50 mL 離心管:一個用于清洗步驟,另一個用于收集樣品。如圖所示,離心柱通過一個白色的塑料小適配器固定在樣品瓶頂部。部件號 1980-1105 每包包含四個可重復使用的適配器。還可通過部件號 1980-1106 額外訂購 8 個適配器。如果您需要離心管,安捷倫提供兩種包裝規(guī)格,部件號 5610-2049,25/包和 190065200,500/包。
使用 AdvanceBio 離心 96 樣品板
高通量 96 樣品板需要單獨的 96 孔板進行清洗和樣品收集步驟。對于清洗步驟,我們建議使用部件號 5043-9308;對于樣品收集步驟,我們建議使用 V 形 96 樣品板,如 5043-9312。離心期間,AdvanceBio 離心 96 樣品板將堆疊在清洗或樣品收集板的頂部,因此請確保離心機可以容納堆疊后的孔板(高 5.1 cm)。
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