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一、概念
電化學發光 (Electrochemiluminescence ) 是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學發光免疫測定以后的新一代標記免疫測定技術。電化學發光法是一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，包括了電化學和化學發光兩個過程。電化學發光 (Electrochemiluminescence ) 可以應用于所有的免疫測定，電化學發光能取代第一代放射免疫的靈敏度，又繼承了第二代酶聯免疫的通量方便，因而廣泛被全球大量用戶所認可和使用，從被載入了免疫分析技術發展的史冊。
免疫分析技術發展的三代
二、MSD電化學發光原理
MSD（Meso Scale Discovery）的電化學發光技術是基于Elisa原理的升級，在96/384微孔板（石墨材質，背面帶有電路）的板底包被捕獲抗體，加入待測樣本，加入三聯吡啶釕標記的檢測抗體，形成雙抗體夾心復合物，將微孔板放入MSD儀器中，微孔板通電后，三聯吡啶釕發生化學反應， 由[Ru(bpy) 3 ] 3+變成 [Ru(bpy) 3 ] 2+，再回到[Ru(bpy) 3 ] 3+，并且這個循環反應可以持續進行，在此過程中會釋放出光子（620nm檢測）被儀器中的CCD相機捕獲，釋放出的光子和待測物的濃度成正比。
三、MSD多因子檢測原理
（1）MSD通過點陣技術，在96/384石墨電極板里的每個孔的不同spot中預先點印上1-10種捕獲抗體，從而實現1-10個指標/每孔的檢測。
通常MSD的V-PLEX試劑盒通過該方法實現多因子檢測，下面是幾款經典熱賣的試劑盒：
K15049D V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit
K15048D V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Mouse Kit
K15059D V-PLEX Proinflammatory Panel 2 Rat Kit
K15396S S-PLEX Proinflammatory Panel 1 (human) Kit（fg/mL靈敏度）
（2）借助linker將捕獲抗體帶到一個孔中的不同區域內，在一個孔內實現多因子檢測。通常U-PLEX試劑盒就是通過該方法實現多因子檢測。
1. Linker與捕獲抗體連接：
U-PLEX plate每個孔內有1-10個spot，每個spot內有基座分別與不同linker匹配；linker有生物素結合區域，可以結合生物素化的捕獲抗體。因此捕獲抗體可以被linker帶到相應的spot里。
例如檢測四種指標，第一步，將四種指標對應的生物素化捕獲抗體與四種linker，分別在四支管子內混合，分別完成linker與捕獲抗體的偶聯，之后加入stop solution終止反應。
2. Linker帶著生物素化捕獲抗體到一個孔的不同區域：
將四種Linker連接的捕獲抗體混合制成混合液A。
將混合液A包被U-PLEX plate，不同的Linker就會帶著連接的捕獲抗體到相應的spot中，完成在同一個孔內包被多種捕獲抗體，實現在一個孔內進行多指標檢測（最多可在一個孔中實現10種指標的同時檢測）
3. 后續流程同ELISA，完成實驗
在板內加入樣本進行孵育結合；
準備四種指標的檢測抗體混合液（抗體帶sulfo-tag標記），加入板內進行孵育結合；
加入read buffer讀板液上機讀板檢測，根據各個spot相應位置的光信號值，定量各檢測指標的濃度。
通常MSD的U-PLEX試劑盒通過該方法實現多因子檢測，可以在以下試劑盒中挑選感興趣的因子，自由組合在一塊板，實現多因子檢測。
| K15604K | U-PLEX Immuno-Oncology Group 1 (human) 131-Plex |
| APRIL/TNFSF13, BAFF-R/TNFRSF13C, BCMA/TNFRSF17, CD20, CD27, CD28, CD40L (soluble), CD276/B7-H3, C-Peptide, CTACK, CTLA-4, ENA-78, Eotaxin, Eotaxin-2, Eotaxin-3, EPO, E-Selectin, FGF (basic), FGF-23, FLT3L, Fractalkine, FSH, Galectin-9, G-CSF, Ghrelin (active), GIP (active), GIP (inactive), GITR/TNFRSF18, GITRL/TNFSF18, GLP-1 (active), GLP-1 (inactive), GM-CSF, gp130 (soluble), Granzyme A, Granzyme B, GRO-α, HAVCR2/TIM-3, HVEM/TNFRSF14, I-309, ICOS, ICOS-L/B7-H2, IFN-α2a, IFN-β, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-2Rα, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-17A/F, IL-17C, IL-17D, IL-17E/IL-25, IL-17F, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IL-29/IFN-λ1, IL-31, IL-33, Insulin, IP-10, I-TAC, LAG3, Leptin, LIGHT/TNFSF14, Luteinizing Hormone (LH), MCP-1, MCP-2, MCP-4, M-CSF, MDC, MIF, MIG, MIP-1α, MIP-1β, MIP-5, MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9 (total), Nectin-4, OX40/TNFRSF4, PD1 (epitope 1), PD1 (epitope 2), PD-L1 (epitope 1), PD-L1 (epitope 2), PD-L2, Pentraxin 3, Perforin, PlGF, PP, Proinsulin, proMMP-9, P-Selectin, PYY (total), RAGE (soluble), RANKL/TNFSF11, RANTES, S100A12, SDF-1α, Tie-2, TIGIT, TLR1, TNF-α, TNF-β, TNF-RI, TNF-RII, TPO, TRAIL, TSLP, VEGF-A, VEGF-D, VEGFR-1/Flt-1, YKL-40 |
四、電化學發光特點
·節約樣本用量（25uL）
·高靈敏度（fg/ml）
·寬線性范圍（5-6log）
·多因子檢測（10因子）
·高重復性
·降低基質效應
MSD電化學發光儀器
SQ120MM
S600MM
儀器特點：
1）fg/mL超高靈敏度
2）5-6個數量級超寬檢測范圍
3）5-25ul超微量檢測
4）適用不同復雜樣本基質（腦脊液，不同抗凝劑處理的血漿，細胞裂解液，細胞上清液等）
5）7大固相包被能力（多肽，病毒表面顆粒，懸浮細胞，抗體，蛋白，細胞膜，細胞裂解液）
6）384孔板單孔檢測1-4指標能力，96孔單孔檢測1-10指標能力
7）3000多種開發/檢測試劑（抗體對，標準品，微孔板，試劑盒，標記試劑，標記二抗）
8）均衡的多物種檢測試劑盒（小鼠，大鼠，猴子，人等）
9）基于細胞水平的結合能力測試（懸浮細胞30分鐘直接貼壁微孔板底）
10）優秀的中國及全球的應用科學家服務團隊，協助MSD用戶設計實驗方案
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