分光法 50T/48S

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

 測(cè)定意義： 羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂 引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。

測(cè)定原理：

H₂O₂/ Fe²⁺ 通過 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，水楊酸能有效捕捉產(chǎn)生的羥自由基并與其反應(yīng)生成有色物質(zhì) 2，3-二羥基苯甲酸，在 510nm 處有大吸收峰，加入具有清除能力的物質(zhì)后，有色物質(zhì)便會(huì)減少，從而可以根據(jù)吸光值的數(shù)值判斷樣品清除羥自由基的能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品：

恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 18 mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品的制備：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測(cè)定。

3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如 5 mg/mL。

操作步驟：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 510nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 在 EP 管中加入如下試劑

 注意：空白管和對(duì)照管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式:

羥自由基清除率 D% =（A 對(duì)-A 測(cè)）÷（A 對(duì)-A 空）×100%

A 對(duì)、A 空、A 測(cè)：對(duì)照管、空白管和測(cè)定管的吸光值。

注意事項(xiàng):

為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對(duì)于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。