詳細(xì)介紹
外泌體是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞間通訊的納米級細(xì)胞外囊泡。外泌體在納米醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著巨大的應(yīng)用潛力。然而,由于需要先進(jìn)的儀器和昂貴的試劑,分離外泌體的技術(shù)受到了限制。在這項研究中,我們開發(fā)了一種從培養(yǎng)細(xì)胞中分離外泌體的凍干方法。利用布拉德福德(Bradford)測定法對分離出的外泌體的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行了表征,并利用掃描電子顯微鏡(SEM)和納米顆粒追蹤分析(NTA)對其大小分布和形狀進(jìn)行了表征。此外,還使用 Western 印跡法評估了 CD63、CD9、CD81、HSP70 和 TSG101 作為重要的外泌體表面標(biāo)記物。為了確認(rèn)外泌體的藥物遞送特性,使用體外模型進(jìn)行了藥物負(fù)載和釋放研究。外泌體還裝載了商業(yè)染料(Cy5、Eosin),以評估其藥物輸送特性。所有這些表征都證實了外泌體的成功分離,其測量值小于 150 nm,具有典型的形狀,并表達(dá)了已知的外泌體表面蛋白標(biāo)記。最后,將激酶抑制劑加載到外泌體上,使用MTT和Annexin-PI檢測法評估它們對白血病細(xì)胞(K562和工程化Ba/F3-BCR-ABL)的抗癌效果。從 MCF-7 細(xì)胞中分離出的外泌體上 MUC1 蛋白的表達(dá)也表明它們具有完整的潛在診斷特性。