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BL21-CodonPlus(DE3) 感受態細胞10×100μL現貨

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更新時間:2017-02-12 08:39:36瀏覽次數:466

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產品簡介

BL21-CodonPlus(DE3) 感受態細胞10×100μL現貨運輸及保存 干冰運輸、-80℃保存,避免反復凍融,有效期半年。

詳細介紹

BL21-CodonPlus(DE3) 感受態細胞10×100μL現貨產品及特點:

本產品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態細胞,適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統中同源重組的菌株,用于產生重組 Bacmid。使用 pUC19 質粒檢測,本產品轉化效率可達 107CFU/μg。 DH10Bac 細胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個 mini-F 復制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位點和 lac Zα-互補因子。輔助質粒包含 tns ABCD 區域,該區域提供了 mini-Tn7 從供體質粒插入親本 Bacmid 靶位點所需要的轉座蛋白。供體如 pFastBac 系列質粒(pFastBac1,pFastBacDual 等)含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂,Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因、昆蟲病毒多角體基因啟動子、多克隆位點和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號。當含有靶基因 pFastBac 的重組質粒轉化到 DH10Bac 細胞后,發生重組后就可產生重組 Bacmid,提取純化重組 Bacmid 轉染昆蟲細胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產生昆蟲病毒。此外,DH10Bac 細胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的產物可以實現β-半乳糖苷酶的α-互補現象,用于重組 bacmid 的藍白斑篩選。菌株基因型為:F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
BL21-CodonPlus(DE3) 感受態細胞10×100μL現貨規格及成分:

BL21-CodonPlus(DE3) 感受態細胞10×100μL現貨使用方法:
1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板:50 μ g/mL Kanamycin,7 μ g/mL gentamicin,10 μg/mL tetracycline,100 μg/mL X-gal,40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為 50-100 μL,可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以 100 μL 感受態細胞為例。
3. 待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入 1-10 ng 重組質粒,用移液器輕輕吹打混勻,冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個離心管中加入 900 μL 無菌的 SOC(不含抗生素),混勻后置于 37℃ 搖床, 200rpm 振蕩培養 4 小時。
6. 用 SOC 培養基進行 10 倍梯度稀釋,如分成 3 個稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各個梯度的培養物用于涂布。等平板中的液體*吸收后,倒置平板, 37℃培養 24-48 小時。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃,視平板上菌落生長情況決定去留。

強壯根瘤菌 Rhizobium validum
黑曲霉 Aspergillus niger
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
RKO(人結腸腺細胞)5×106cells/瓶×2
桿菌屬 Lactobacillus sp.
根瘤菌
TSCCa(人舌鱗細胞)5×106cells/瓶×2
溶藻弧菌 Vibrio alginolyticus
裂褶菌
枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis
HCCC-9810(人肝內膽管細胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌 Lactococcus lactis
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
SDS-PAGE Loading Buffer (還原,5x)10ml國產
戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus
毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipesDesulfovibrio medium (seawater)
Ferroglobus placidus medium
Half strength nutrient broth or agar
Hippea jasoniae medium
M17 medium (modified)
Medium with edta as carbon source
Methylobacterium thiocyanatum medium
Modified isp5 medium
Nutriment agar with 150g/l nacl
Prey seawater broth
Rhodobium medium
Spiribacter medium (830 + 12% marine salts)
BL21-CodonPlus(DE3) 感受態細胞10×100μL現貨Sulfurospirillum mv medium
Thermoplasma volcanium medium
TPT 18 medium
YMA medium (modified)
大腸桿菌DH5α(pir)菌種
釀酒酵母NMY51菌種

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