詳細(xì)介紹
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYF圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYF圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;5-6天一次
傳代情況 P3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
柱式血清血漿 RNAout 50 次
柱式血液 DNAout 200 次
柱式血液 DNAout 50 次
柱式血液 DNA-RNAout 50 次
柱式血液 mtDNAout,測(cè)序 10 次
柱式血液 RNAout 50 次
柱式藻類 RNAout 50 次
柱式真菌 DNAout 50 次
柱式真菌 RNA-DNA 雙提試劑盒 50 次
柱式真菌 RNAout 50 次
柱式植物 DNAout 50 次
柱式植物 mtDNAout,測(cè)序 10 次
柱式植物 RNA-DNA 雙提試劑盒 50 次
柱式植物 RNAout 50 次
柱式植物 RNAout 2.0 50 次
柱式植物葉綠體 DNAout 15 次
柱式植物油 DNAout 50 次Cannabidiolic Acid (exempt preparation) (1 mg)CBDA|β-Resorcylic Acid; 2,4-dihydroxy-3-[(1R,6R)-3-methyl-6-(1-methylethenyl)-2-cyclohexen-1-yl]-6-pentyl-benzoic acid
Fialuridine (25 mg)5-Iodo-2’-Fluoroarauracil|FIAU|Fluoroiodoarauracil|NSC 678514; 1-(2-deoxy-2-fluoro-β-D-arabinofuranosyl)-5-iodo-2,4(1H,3H)-pyrimidinedione
5-Cyano-2,3-di-(p-tolyl)tetrazolium (chloride) (100 mg)CTC|Cyanotolyl Tetrazolium Chloride; 5-cyano-2,3-bis(4-methylphenyl)-2H-tetrazolium, monochloride
MMB2201 (1 mg)I-AMB; methyl (1-(5-fluoropentyl)-1H-indole-3-carbonyl)-L-valinate
Camostat (mesylate) (5 mg)FOY 305|Foipan; 2-(dimethylamino)-2-oxoethyl ester, 4-[[4-[(aminoiminomethyl)amino]benzoyl]oxy]-benzeneacetic acid, monomethanesulfonate
Prothionamide (1 g)Tebeform; 2-propyl-4-pyridinecarbothioamide
5-hydroxy Tryptophol (10 mg)NSC 84416; 5-hydroxy-1H-indole-3-ethanol
17α,20β-Dihydroxy-4-pregnen-3-one (5 mg)17α,20β-DHP|17α,20β-dihydroxy Progesterone; 17,20R-dihydroxy-pregn-4-en-3-one
NU 6027 (1 mg)6-(cyclohexylmethoxy)-5-nitroso-2,4-pyrimidinediamine
ATB-346 (10 mg)4-
PBIT (1 mg)2-
O6-Benzylguanine (10 mg)NSC 637037; 6-(phenylmethoxy)-9H-purin-2-amine
AB-CHMINACA metabolite M2 (5 mg)N-[[1-(cyclohexylmethyl)-1H-indazol-3-yl]carbonyl]-L-valine
4-Chloromethcathinone (hydrochloride) (5 mg)4-CMC|Clephedrone; 1-
1,2-O-Dioctadecyl-rac-glycerol (250 mg)2,3-bis(octadecyloxy)-1-propanol
TropicamideRo 1-7683; N
柱式質(zhì)粒 DNAout 100 次
柱式質(zhì)粒 DNAout 50 次
離心管 ( 配研磨杵用 ) 1000 只
離心管 ( 配研磨杵用 ) 50 只