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抗體稀釋液和ELISA相關(guān)溶液的配制

時間：2010-7-21閱讀：3157

抗體稀釋液和ELISA相關(guān)溶液的配制

窗體頂端

1、抗體或免疫球蛋白稀釋液0.01mol/L pH7.2PBS
　

NaH2PO4·2H2O	0.39克
Na2HPO4	1.27克
NaCl	0.85克
NaN3	200mg
H2O（蒸餾水）	至 1000ml

2、ELISA洗液及HRP標記抗體稀釋液PH7.4，PBST

NaCl	2.0克
KH2PO4	0.2克
Na2HPO4·12H2O	2.9克
KCl	0.2克
NaN3	0.2克
H2O	至 1000ml
吐溫（Tween）20	0.5ml
4°C保存?zhèn)溆?/font>

3、包被液（簡稱CB）pH9.6

Na2CO3	1.59克
NaHCO3	2.93克
NaN3	0.2克
H2O	至 1000ml
密封蓋好，4°C存放備用

4、ELISA底物液（可溶性底物）

磷酸-檸檬酸緩沖液pH5.0
0.1mol/L檸檬酸（21.014克/100ml）	24.3ml
0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/1000ml）	25.7ml
H2O	50ml
4°C存放備用

5、DAB底物液（不溶性底物，組化病理等）
　

0.05mol/L pH7.6 Tris-HCL
Tris	6.05克
HCL（36%）	3.15克（約2.7ml濃HCL）
H2O	至 1000ml
DAB為3´，3´二氧基聯(lián)苯胺，不溶性底物，呈棕紅色

6、DAB溶液配制：（組化及Western blot 顯色）
稱DAB30mg，用0.05mol/L pH7.6Trs-HCL緩沖液100ml溶解,如有沉淀，過濾后使用，一般新鮮配制使用。用前加入1%H2O2 1-1.5ml,H2O2濃度為0.01%，混均后使用。 7、3´，3´，5´，5´，-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）溶液配制：
用二甲基甲酰胺（dimethylformamide，DMF）或無水乙醇，將TMB配成1%濃度，4°C保存半年以內(nèi)使用。使用前，用pH5.0磷酸-檸檬酸底物液9.9ml加入0.1ml（1mg/TMB）1%TMB液，再按每毫升TMB加入30%的H2O2 1ul，混勻后立即使用。2N H2SO4終止后，450nm測定OD值。