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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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如何使用細(xì)胞分離液

時(shí)間：2023/12/11閱讀：435
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細(xì)胞分離液的配置與使用：
1、不同濃度分離液的制備: 先用9份分離液與1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓，然后用生理溶液稀釋到所需濃度。
2、不連續(xù)密度梯度層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤(rùn)，除去多余血清，這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。
在制備過(guò)程中一般用長(zhǎng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時(shí)相鄰兩層比重相差不大時(shí)，可將液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。
3、裝樣：樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異，一般加樣體積不宜過(guò)大，細(xì)胞濃度也不可過(guò)高，否則會(huì)影響細(xì)胞的分離和回收。
4、離心：一般采用離心力為400g，時(shí)間20～25min。
由于多層之間密度差別不大，因此離心機(jī)加速、降速時(shí)要慢，要平穩(wěn)。
5、取樣：當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時(shí)，可逐層去除液后收集界面部位的細(xì)胞;有時(shí)大部分細(xì)胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測(cè)用。

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