ODIPY™ 581/591 十一烷酸可用于檢測細胞和細胞膜中的活性氧 (ROS)。 染料的多不飽和丁二烯基部分的氧化導致熒光發射峰從～590 nm移動到～510 nm。 在還原狀態下，BODIPY™ 581/591 十一烷酸的激發和發射值為 581/591 nm； 氧化后，激發和發射值移至 488/510 nm。

該產品我們建議用高質量無水 DMSO 溶解，母液濃度 1 至 10 mM，≤?20°C 避光保存。

BODIPY™ 581/591 C11 檢測脂質過氧化的原理

BODIPY™ 581/591 C11的分子結構如圖2所示，染料的多不飽和丁二烯基部分（紅色虛線框）可與ROS發生反應，導致染料的熒光發射峰從～590 nm移動到～510 nm。 在還原狀態下，BODIPY™ 581/591 C11的激發和發射值為 581/591 nm，呈現紅色熒光； 經氧化后，激發和發射值移至 488/510 nm，呈現出綠色熒光。

圖2. BODIPY™ 581/591 C11 檢測脂質過氧化的原理²

BODIPY™ 581/591 C11染料使用方法

染料溶解與保存：

BODIPY™ 581/591 C11的分子量為504.4 g/mol。1 mg染料可以使用198 µl 高質量無水DMSO溶解成10 mM母液，溶解好的母液于-20 ℃分裝避光保存，避免反復凍融。

染色流程：

染料的推薦工作液濃度為1-10 µM，可以使用培養基進行稀釋，孵育時間建議為30分鐘，的工作濃度和孵育時間需要根據實驗體系進行調整。具體染色流程請參考圖3。

圖3. BODIPY™ 581/591 C11染料使用流程

BODIPY™ 581/591 C11結果分析

BODIPY™ 581/591 C11適用于多種分析方法（流式細胞儀、熒光顯微鏡、高內涵），比較常用的是流式細胞儀和熒光顯微鏡。下面，我們分別以這兩種檢測平臺為例，介紹一下結果分析方法。根據染料的光譜性質，我們可以使用以下通道來進行檢測：

*在使用流式細胞儀檢測還原態時，需要使用561nm激光器激發的PE通道來檢測。對于PE通道使用488nm激光器激發的流式細胞儀，建議只檢測FITC通道的信號（如同時檢測FITC和PE通道，兩個通道之間存在干擾，導致結果不準確），這也是大多數文獻中所使用的方法。

流式細胞儀檢測結果

典型的流式數據如圖4所示,僅使用FITC通道檢測氧化態，使用直方圖對數據進行分析。與對照組對比，經誘導脂質過氧化后，染料氧化態增加，FITC通道熒光強度增強，信號峰右移（圖4A），也可以對氧化態平均熒光強度進行統計比較（圖4B）。

圖4. BODIPY™ 581/591 C11檢測脂質過氧化流式結果分析

 Hypoxia–reoxygenation (HR)誘導脂質過氧化，RLX處理抑制脂質過氧化的產生。³

熒光顯微鏡檢測結果

典型的熒光顯微鏡成像結果如圖5所示，分別使用FITC和Texas Red通道來檢測染料的氧化態和還原態。經誘導產生脂質過氧化后，綠色信號增強（圖5A）。在統計時，使用氧化態與還原態熒光強度的比值來對不同的實驗組進行比較（圖5B）。氧化態/還原態比值越高，說明脂質過氧化程度越高。

圖5. BODIPY™ 581/591 C11檢測脂質過氧化成像結果分析⁴

脂質過氧化染料常見問題解析

問：BODIPY™ 581/591 C11熒光探針可以兼容固定嗎？

答：BODIPY™ 581/591 C11熒光探針適用于活細胞檢測，不兼容固定。此外，該染料也不能用于固定后的樣品。

問：樣品中含有GFP熒光蛋白，還可以使用BODIPY™ 581/591 C11熒光探針嗎？如不能，有其他產品推薦嗎？

答：由于BODIPY™ 581/591 C11熒光探針在氧化態時呈現綠色，與細胞中的GFP沖突，因此不建議在含有GFP的樣品中使用此探針檢測脂質過氧化。向您推薦B3932，其可以兼容GFP，在還原態時，激發和發射光波長分別為665/676 nm，被氧化后激發和發射光波長會變成580/605 nm。

參考文獻

1. van Eck, H. J. N., Akkermans, G. R. A., Alonso van der Westen, S., Aussems, D. U. B., van Berkel, M., Brons, S., Classen, I. G. J., van der Meiden, H. J., Morgan, T. W., van de Pol, M. J., Scholten, J., Vernimmen, J. W. M., Vos, E. G. P., & de Baar, M. R. (2019). High-fluence and high-flux performance characteristics of the Superconducting Magnum-Psi Linear Plasma Facility. Fusion Engineering and Design, 142, 26–32. 

2. Wang, F., Naowarojna, N., & Zou, Y. (2022). Stratifying ferroptosis sensitivity in cells and mouse tissues by photochemical activation of lipid peroxidation and fluorescent imaging. STAR Protocols, 3(2), 101189. 

3. Nistri, S., Fiorillo, C., Becatti, M., & Bani, D. (2020). Human relaxin-2 (serelaxin) attenuates oxidative stress in cardiac muscle cells exposed in vitro to hypoxia–reoxygenation. evidence for the involvement of reduced glutathione up-regulation. Antioxidants, 9(9), 774. 

4. Murray, M. B., Leak, L. B., Lee, W. C., & Dixon, S. J. (2023). Protocol for detection of ferroptosis in cultured cells. STAR Protocols, 4(3), 102457.