Dynabeads 蛋白 A 為表面共價偶聯(lián)有重組蛋白 A （～45 kDa）的 2.8 µm 均勻超順磁性微珠。Dynabeads 蛋白 A 為免疫沉淀（IP）提供了可替代 Sepharose 樹脂或瓊脂糖樹脂的出色替代產(chǎn)品，手動和自動方案均可用。

?在不到40分鐘內(nèi)完成 IP
? 高靶蛋白得率和低抗體消耗
? 極低非特異性結(jié)合及高信噪比
? 無需色譜柱、離心步驟或耗時的預(yù)清洗步驟
?高重現(xiàn)性和高通量與 KingFisher 儀器兼容

小貼士：如何減少免疫沉淀中的背景

Dynabeads磁珠可以被磁化，與磁力架一起使用時，可輕松將其拉到樣品管的一側(cè)。這一特點使得移除緩沖液或上清液變得非常容易，不會造成任何破壞或樣品損失。

Dynabeads磁珠的一個關(guān)鍵特點是其表面清晰，沒有孔隙。所有的結(jié)合都發(fā)生在外表面，從而防止任何不需要的蛋白質(zhì)被困在內(nèi)部。

為了進一步減少免疫沉淀中的背景，建議洗滌含有感興趣蛋白質(zhì)的磁珠，以去除任何不需要的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段。

圖1. 用于免疫沉淀的 Dynabeads Protein A 磁珠與其他供應(yīng)商的對比。進行Western blot來比較使用1）Sepharose離心柱、2）Sepharose混懸液、3）瓊脂糖混懸液和離心柱、4）樹脂離心柱、5）Dynabeads Protein A磁珠的方案時間和背景的差異（每種方法一式兩份）。Dynabeads Protein A磁珠的免疫沉淀具有低背景且至少節(jié)省14分鐘的時間。

可快速且簡便的進行手動 Dynabeads 分離
手動方案簡單且可在40分鐘內(nèi)完成。首先，將靶蛋白的抗體與 Dynabeads 蛋白 A 在試管中孵育 10 分鐘。通過將試管置于 DynaMag 磁力架中并去除上清液，洗去過量抗體。然后，抗體包被磁珠可用于多種下游應(yīng)用，包括 IP、Co-IP、染色質(zhì) IP (ChIP)、RNA IP (RIP)、小規(guī)模 IgG 純化和蛋白純化。由于 Dynabeads 的磁性，使用 DynaMag 磁力架可輕松收集結(jié)合材料。微珠上的重組蛋白 A 不含白蛋白結(jié)合位點，因此在程序中不會共純化白蛋白。IP 速度快，并且具有高得率、高重現(xiàn)性且非特異性結(jié)合極少，因此無需預(yù)清洗步驟。

自動 Dynabeads 分離有助于提高通量并縮短手動操作時間
如果您并行處理多份樣品，洗滌步驟數(shù)量和手動操作時間會與樣品數(shù)量成比例地增加。一次處理多個樣品時，移液管及其他手動操作獲得的結(jié)果往往不如自動化。為了更好地處理中等至高通量的樣品，減少手動操作時間并確保可重現(xiàn)性較高，我們開發(fā)了適用于 KingFisher Flex 和 KingFisher Duo Prime 儀器的 IP 方案。自動化方案復(fù)制人工方案，從而獲得同樣高的靶蛋白產(chǎn)率以及相同的低非特異性結(jié)合和高可重現(xiàn)性。無論您要處理 10 個還是 96 個樣品，IP 方案可在 40 分鐘內(nèi)完成。’只需將試劑加載到孔板上，按下“開始”按鈕，到您準備好下游分析時，IP 即可完成。根據(jù)抗體和靶蛋白的豐度和/或特異性，可能需要進行一些優(yōu)化（例如，孵育時間）。

?KingFisher Duo 儀器適用于低至中通量（1-12 份樣品/運行）
?KingFisher Flex 儀器適用于高通量（12-96 份樣品/運行）

溫和分離可盡可能減小對蛋白的物理應(yīng)力
用于 Dynabeads 蛋白 A 的磁性分離技術(shù)快速且溫和，可盡可能減小對靶蛋白的物理應(yīng)力。這允許分離和濃縮不穩(wěn)定的復(fù)合物，否則在長時間孵育期間可能會被蛋白酶解離或被其破壞。保存天然蛋白構(gòu)象和大蛋白復(fù)合物。

結(jié)合強度和結(jié)合能力
Dynabeads 蛋白質(zhì) A 可以分離大多數(shù)哺乳動物的免疫球蛋白（Ig）。捕獲的 Ig 量取決于起始樣品中 Ig 的濃度以及 Ig 的類型和來源。100µL Dynabeads 蛋白 A 將從每毫升含有 20–200µg IgG 的樣品中分離出約 25–30 µg 人 IgG。絕大部分位點與 Fc 結(jié)合，實現(xiàn)優(yōu)化的 Ig 取向。抗體與微珠的光滑外表面結(jié)合，因而不會像與基于 Sepharose/瓊脂糖的微珠結(jié)合時一樣吸附在大孔中。所有抗體都可用于蛋白結(jié)合，因此，僅需加入少量抗體，靶蛋白得率依舊很高。光滑磁珠表面也實現(xiàn)了 Dynabeads 出色的低非特異性結(jié)合能力。