明膠酶譜MMP（2/9）檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

酶譜法(Zymography) 基于SDS- PAGE電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法檢測(cè)MMP-2、MMP-9活性，靈敏度可達(dá)10pg，高于ELISA 方法。

基本原理和程序是:以加有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠分離含蛋白酶的樣品，電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Bufer孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9的位置(酶譜)，可檢測(cè)樣本有血液、滲出液、細(xì)胞提取物等。

服務(wù)周期: 10工作日

結(jié)果提供:結(jié)果報(bào)告、代表性圖片，操作流程及相關(guān)試劑儀器信息。

明膠酶譜MMP（2/9）檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣本提供需知:

1)客戶告知實(shí)驗(yàn)分組、編號(hào)及背景設(shè)計(jì)資料，具體要求請(qǐng)事先說明;

2)標(biāo)本收集、保存與運(yùn)送:

①組織樣品:新鮮組織放入液氮或-70 度保存,組織不少于100mg;

②培養(yǎng)細(xì)胞:通過細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2x106個(gè)細(xì)胞于EP管,加入0.5ml生理鹽水，混勻后保存于冰箱(-70°C，避免反復(fù)凍融) ;

③血液細(xì)胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5ml生理鹽水，保存(-70°C可長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融)

④血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(49C可保存15-20 天, -70°C可長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融)

4)樣本運(yùn)輸:

①組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸;

②細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出) ;

③血清或上清液直接加冰袋寄(送視路程遠(yuǎn)近2 3天可到達(dá))。

客戶須知:

檢測(cè)系統(tǒng)含陽性參照或內(nèi)參，報(bào)價(jià)含蛋白提取

 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1.制備聚丙烯酰胺時(shí)應(yīng)注意排除氣泡 。

2.明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和PH值等因素的影響，因此緩沖液 配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。

3.用大梳子

4.孵育液的PH在7.5-7.6，復(fù)性的TRITON時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)有絮狀物，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)盡量使用新鮮配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中，因?yàn)闀?huì)改變孵育液的PH值，在普通孵箱即可。

6.明膠要4度保存，配好后1周內(nèi)使用

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：