產品及特點 2X 探針法qPCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒） 是基于熒光探針檢測的即用型 PCR 試劑盒，可以對靶片段進行實時定量 PCR 分

析（quantitative PCR、qPCR）。產品含有經過優化的緩沖液組分、熱啟動 Taq DNA 聚合

酶、Taq DNA 穩定劑、dNTPs、MgCl2和穩定劑等所有實時定量 PCR 所需要的成分，用戶

只需加入基因組 DNA 或 cDNA 模板、引物和探針即可進行探針法實時定量 PCR 反應，具有

廣泛的用途。2X 探針法qPCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒） 具有下列特點：

1. 以 2×Mix 提供，用戶只需準備模板、引物、探針和 ROX 染料（取決于 qPCR 儀器）

即可以進行探針法實時定量 PCR 實驗，非常方便快捷，降低了操作誤差。

2. 各成分的濃度和比例都經過精心優化，反應的靈敏度高，特異性強。靈敏度可以

達到 50 拷貝/反應（跟模板質量，引物設計等相關）。

3. 既可用于 TaqMan 探針 qPCR，也可以是分子信標（molecular beacon）探針 qPCR。

4. 靈敏度和專一性比染料法熒光定量 PCR 更高。

5. 可用于基因表達分析、SNP 分析、拷貝數分析等實驗。也可以用于定性檢測。

6. 本產品只能用于科研，1mL 足夠 100 次 20uL 體系的探針法 qPCR 反應。

規格及成分 成 份 編 號 塑料袋包裝 十孔盒包裝

2×探針法 qPCR Mix 190303 1 mL（棕色蓋） 1 mL（棕色

蓋）×10

使用手冊 190303sc 1 份 1 份

2X 探針法qPCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒）

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存, 不凍融時保存期限為 24 個月。如果需要每天使用，可在 4℃放置三

周。

自備試劑 DNA 模板、引物、超純水。

使用方法

1. 如果有 N 個樣品并且做定量分析，設置 N+7 個反應，多出的 7 個中，6 個是做標

準曲線的陽性對照，一個是陰性對照（NC）。在 N+7 個 PCR 管中，加入下列成分。如

果是做定性分析，則 6 個做標準曲線的樣品縮減成一個陽性對照（PC），用戶自己需要

根據下表進行適當修改（把 6 個標曲反應改成 1 個陽性對照反應）。

成分 N 個樣品管

6 個標準

曲線管

NC 管

2×探針法 qPCR MagicMix 各 10 uL 各 10 uL 10 uL

自備引物 1（10uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自備引物 2（10uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自備模板 DNA

基因組 DNA 10-100ng 不加 不加

或 cDNA 1-10ng 不加 不加

自備陽性對照模板（6 各梯度） 不加 各 1 uL（各

加 1 個梯度） 不加

陰性對照模板（一般用水） 不加 不加 1 uL

自備探針（0.5uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL

自備 50×自備 ROX I 或 ROX II

染料（見注）

各 0.4 uL 各 0.4 uL 0.4 uL

補超純水到 20 uL 20 uL 20 uL

注，下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準。

1、不需要 ROX 的機型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、，、

Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號的熒光 PCR 儀

器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會影響整個 PCR 分析。

2、需要使用 ROX I 的機型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、

Step One Plus。

3、需要使用 ROX II 的機型：ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、

Corbett RotorGene 3000。

2. 放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 下表的擴增參數僅供參考，一定需要根據靶分子長度，引

物和探針的 Tm 值、標記染料的種類等進行調節。一般選擇三步法 PCR：

步驟 反應參數 備注

預變性 94℃ 2 分鐘

PCR（35-45 次循環）

94℃ 15 秒

靶分子 長 度在

80-200bp

55-65℃ 15-30 秒

在此步采集熒光信號，通

道根據標記染料決定

72℃ 30 秒

如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以選擇兩步法 PCR：

步驟 反應參數 備注

預變性 94℃ 2 分鐘

PCR（35-45 次循環）

94℃ 15 秒

靶分子 長 度在

80-200bp

60℃ 60 秒

在此步采集熒光信號，通

道根據標記染料決定

3. 數據處理

如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪

制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推

算出其濃度。

如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性。一般情況下，陰性對照 Ct 大于或

等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于或等于 30。

對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果

在 35-40 之間，則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小

于 40，則為陽性。

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